食用香料—香兰素的抗氧化活性研究

[第1楼 PID4593] 2008-11-07 16:01 春香 写道:

食用香料—香兰素的抗氧化活性研究

摘要：对食用香料香兰素的抗氧化活性进行了研究。分别采用甲基紫光度法、ＴＢＡ显色法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测法评价了香兰素的抗氧化效果。结果表明，香兰素对蛋白质氧化降解具有明显的保护作用，对脂质过氧化有较好的抑制作用，具有良好的清除 ＨＯ·自由基的能力，其抗氧化活性远远强于Ｖｃ。
关键词： 香兰素； Ｖｃ； 抗氧化活性
香兰素（ ｖａｎｉｌｌｉｎ）又名香草醛，为天然植物香料，主要存在于香子兰科植物果实中，在轻工业、化学工业、农业生产上都有广泛的应用，是医药化工中重要的原料或中间体，是用来制造治疗高血压、心脏病、皮肤病
的常用药物。香料在食品上的应用，主要是改善食品风味，增添食物色泽。另外，有防止食品变质的抗氧化及抗菌作用，研究发现，许多香料如： 迷迭香、姜黄、丁香、百里香等都具有较强的抗氧化活性。
活性氧（ＲＯＳ）是人体组织中许多生化反应的中间代谢产物， 身体在代谢过程中所产生的 ＲＯＳ 必须与组织细胞中的抗氧化系统达成平衡， 一旦身体的抗氧化系统失去平衡， 细胞中的氧化损害累积到相当程度， 就会导致细胞结构和功能破坏、机体组织损伤。因此，ＲＯＳ 是包括肿瘤、心脑血管疾病、帕金森疾病、老年痴呆病和慢性肺炎等在内的多种疾病的重要诱因。寻找能够有效清除自由基而无毒副作用的抗氧化剂，预防和减轻上述疾病的发生和发展，一直是人类研究的重要课题之一。本文用甲基紫光度法、ＴＢＡ 显色法、蛋白质凝胶电泳法测定了香兰素的体外抗氧化活性， 并比较、分析了香兰素与已知抗氧化剂 Ｖｃ 的抗氧化能力。

[第2楼 PID4593] 2012-08-20 19:27 Robot :

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[第3楼 PID4594] 2008-11-07 16:01 春香 写道:

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１ 材料与方法
１．１ 材料
香兰素：上海第一试剂公司；Ｖｃ 、ＡＡＰＨ（ ２，２－偶氮二（２－脒基丙烷）二盐酸盐）、ＢＨＴ（２，６－二叔丁基对甲基苯酚）：Ｓｉｇｍａ公司； 牛血清白蛋白（ ＢＳＡ）； 华美生物工程公司；十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）：Ｓｅｒｖａ；实验用鼠由甘肃省肿瘤医院动物房提供， 其余试剂均为国产分析纯。
１．２ 仪器
ＬＳＨＺ－ ３００ 冷冻水浴恒温振荡器： 江苏太仓市实验仪器厂； ＤＹＹ－ ６Ｂ 型稳压稳流电泳仪： 北京六一仪器厂； Ｌ８－ ６０Ｍ 型超高速离心机： Ｂｅｃｋｍａｎ； ７２１ 分光光度计： 上海第三分析仪器厂。
１．３ 方法
１．３．１ 清除 ＨＯ·自由基的测定
取两份２．０６ ｍｍｏｌ／Ｌ甲基紫溶液，调ｐＨ为 ３．５后，向其中一份加入０．２ ｍｍｏｌ／ＬＦｅＳＯ４，以 ０．６ ％Ｈ２Ｏ２启动反应， 一段时间后，以水为参比，于 ５８２ ｎｍ 处测吸光度值，记为 Ａ１。另一份不加 Ｆｅｎｔｏｎ 试剂，测吸光度值，记为 Ａ０。则△Ａ＝Ａ１－ Ａ０。测定清除率时， 加入待测试剂，测吸光度值， 记为 Ａ２。ＨＯ·的清除率＝（ Ａ２－ Ａ１） （／ Ａ１－ Ａ０） ×１００ ％。

[第4楼 PID4595] 2008-11-07 16:01 春香 写道:

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１．３．２ 脂质过氧化的测定
微粒体的制备参照 Ｚｈｏｕ 等的方法。Ｌｏｗｒｙ 法测定蛋白质浓度。
脂质过氧化的测定参照 Ｃａｉ 等。１ ｍＬ 反应体系中含有 ０．２ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ， ２４０ μｇ￣４００ μｇ 的微粒体蛋白，加入 ０１ｍｍｏｌ／Ｌ 抗坏血酸及 １０ μｍｏｌ／ＬＦｅＳＯ４ 启动反应。
在体系中加入 ０．１ ｍＬ不同浓度待测物，于 ３７ ℃振荡孵育１ｈ 后，１．０ ｍＬ２０ ％ 三氯醋酸终止反应，加入１．５ ｍＬ０．６７ ％ 硫代巴比妥酸， 于沸水浴显色 ３０ ｍｉｎ， 冷却后离心，上清液于 ５３２ ｎｍ 比色，其半抑制浓度ＩＣ５０。
１．３．３ 蛋白质氧化降解的测定
蛋白质氧化测定依 Ｈ．Ｙ．Ｋｗｏｎ 等 ［６］的方法稍加改进。１０μｇ牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的氧化在 ０．２ｍｏｌ／ＬＰＢＳ中由水溶性偶氮引发剂２０ｍｍｏｌ／ＬＡＡＰＨ 启动，加入不同浓度的待测物，３７ ℃水浴孵育２４ｈ后，加入０．０２ ％ＢＨＴ以防止氧自由基的进一步形成。样品按常规ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，０．０５ ％考马斯亮蓝Ｒ－２５０ 染色。
２ 结果
２．１ 对 ＨＯ·自由基的清除作用
香兰素对ＨＯ·自由基的清除率呈现一定的量效关系（见图 １ Ａ），随香兰素浓度的增加，对 ＨＯ·的清除效果明显增强，在浓度为１８０μｍｏｌ／Ｌ清除率达到５０％，Ｖｃ 在 １０００μｍｏｌ／Ｌ时的清除率仅为４１ ％（图１Ｂ），对 ＨＯ·的清除作用不及香兰素。

[第5楼 PID4596] 2008-11-07 16:02 春香 写道:

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２．２ 对脂质过氧化的抑制作用
香兰素对脂质过氧化的抑制率也呈现一定的量效关系（见图 ２ Ａ），随香兰素浓度的增加，对脂质过氧化的抑制效果明显增强，在浓度为７６μｍｏｌ／Ｌ抑制率达到５０ ％，与此相比，Ｖｃ对脂质过氧化的抑制作用要远远低于香兰素，Ｖｃ在 ５ ０００ μｍｏｌ／Ｌ时抑制率达到 ５１ ％

[第6楼 PID4597] 2008-11-07 16:02 春香 写道:

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２．３ 对蛋白质氧化的保护作用
如图３所示，在１０ ｍｍｏｌ／ＬＡＡＰＨ引发的氧化体系中，香兰素（ Ｖ）对ＢＳＡ的氧化降解有很强的保护作用，当浓度为 １２．５ μｍｏｌ／Ｌ 时， 即有微弱的保护作用。当浓度为 １００ μｍｏｌ／Ｌ 时，已完全保护了蛋白质的氧化降解（图３Ｈ）。Ｖｃ对ＡＡＰＨ引发的蛋白质氧化降解的作用则较差，在 ２ ０００ μｍｏｌ／Ｌ 时，才出现微弱的保护作用。

[第7楼 PID4598] 2008-11-07 16:03 春香 写道:

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３ 讨论
近年来， 国内外对香兰素已有很多研究， 主要为香兰素合成方法的研究， 有关香兰素抗氧化性的报道极少，香兰素在国内除直接用于制作食品外， 主要用于调制食用香精，香兰素对含油食品具有明显的抗氧化作用，可显著延长含油食品的保质期，对细菌及真菌的生长有明显的抑制作用，另外，香兰素对癫痫也有一定的治疗效果［８］。Ｖｃ 是已知的 ＨＯ·清除剂，对自由基具有很强的清除能力，是一种较早应用于食品、医药和临床的抗氧化剂。在鉴定、比较各种药物对自由基的清除能力时经常以它作为参照物。不同浓度 Ｖｃ 对 Ｆｅｎｔｏｎ反应所产生的羟基自由基进行清除时， 其浓度与清除率之间存在明显的量效关系。但从本实验结果来看，Ｖｃ抗脂质过氧化的作用较弱， 表明 Ｖｃ在此过氧化系统中的抗氧化作用是十分有限的。
在本实验体系中，低浓度的香兰素对脂质过氧化和蛋白质的氧化降解，表现出很强的保护作用。其清除ＨＯ·自由基、抑制脂质过氧化和对蛋白质的氧化降解的保护作用明显优于Ｖｃ。实验证明，香兰素是一种很好的抗氧化剂，具有良好的抗氧化活性。我国具有丰富的香兰素资源，很大一部分以化工生产的中间体出口到国外，国内对香兰素的应用也仅限于食品、纺织和合成化工等行业，通过对香兰素抗氧化活性的研究，香兰素在食品和医药行业将具有更加广泛的开发前景。